在自然怀孕时,通过性交方式,男性将精液射入阴道内,经过孵育后,部分具有受精能力的成熟精子穿越宫颈,并通过宫颈粘液的理化作用,精子获得授精能力,最终到达受精部位与卵子相遇并结合。在人工授精技术中,宫腔内人工授精(IUI)是最常用的授精方式,取代了阴道内人工授精(IVI)和宫颈内人工授精(ICI),直接将精子注入宫腔。该法绕过精子在阴道孵育、穿过宫颈粘液,经过自然筛选的环节。为了避免将精浆、非精子成分和劣质精子带入宫腔,影响子宫腔的环境和受精。因此必须采用医疗手段,把优质的精子分离出来,并使精子获能(受精能力,即使注入子宫腔的精子如同经过宫颈粘液选择的精子一样,获得正常受精能力)。IUI精液处理最常用的方法有上游法和双层密度梯度离心法,根据精液中精子的浓度、快速运动精子的百分比来选择采用哪种方法。
一、上游法
上游法是将充分液化的精液加入试管底部,再沿管壁缓慢加入培养液,勿混,以大约45度倾斜放置,共同孵育一段时间,使活动能力好的精子游到上层培养液中,然后收集含精子的上层培养液,离心浓缩,调节精子浓度,即可用于IUI。优点在于操作简便、成本低廉、不良反应少,并可获得更低 DNA 碎片率的精子;缺点是精子回收率相对低,对于前向运动精子总数少、黏稠或不液化的精液不适宜采用上游法处理。
二、双层密度梯度离心法
双层密度梯度离心法是将高浓度梯度液加入离心管底部,在缓慢加入等体积的低密度梯度液,最后将液化好的精液缓慢加到最上层梯度液液面上。注意保持各层之间形成一个界面。经离心,优质精子沉淀到管底,再用精子培养液洗涤沉淀的精子后,调整精子浓度,备用。该方法可用于前向运动精子总数较少的精液。有研究认为,常规参数异常的精子经该法处理后,得到优选精子的顶体反应率、低渗肿胀试验阳性率和核成熟的精子比例均优于上游法。另有研究表明,经DNA碎片率检测发现,该法处理后的精子DNA完整性明显高于经上游法处理的精子。
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